As abordagens tradicionais baseadas em marcadores geralmente exigem que os componentes individuais do bioensaio sejam marcados para que a detecção seja possível. Muitos bioensaios convencionais usam um ligante imobilizado para capturar um analito alvo da solução, antes de empregar reagentes de detecção especializados para analisar a interação entre as duas moléculas.
Exemplos dessas abordagens incluem o ensaio imunoenzimático (ELISA) ou a citometria de fluxo com base em filete. A marcação pode alterar a estrutura e/ou função de biomoléculas e distorcer os resultados experimentais.
Em alguns casos, eles podem desativar completamente a biomolécula que está sendo estudada. Além disso, a ligação não específica dos componentes dos marcadores a outros componentes do bioensaio pode produzir sinal de fundo indesejado. Isso é especialmente problemático ao trabalhar com amostras complexas, como sobrenadantes de cultura de células, soro ou plasma.
A detecção de interações moleculares sem marcadores apresenta uma alternativa atraente às abordagens tradicionais baseadas em marcadores. A tecnologia sem marcadores (também detecção sem marcadores ou sensor sem marcadores) usa biossensores baseados em impedância ou óptica para medir as mudanças que ocorrem na ligação do analito a um ligante imobilizado em uma superfície do biossensor. Essa abordagem permite que a interação seja monitorada em tempo real sem manipulação artificial dos componentes individuais do ensaio.
Obtenha abaixo uma visão geral de como a tecnologia sem marcadores (aqui, a inovadora tecnologia de GCI) difere das técnicas tradicionais de bioensaio.
Quais são as vantagens da análise de interação sem marcadores?
As técnicas analíticas de solução sem marcadores são usadas no estudo direto de moléculas nativas. Elas geram dados biologicamente relevantes que permitem a compreensão das interações moleculares sem o uso de sondas ou marcadores artificiais e, portanto, fornecem dados com maior probabilidade de refletir o comportamento natural dessas moléculas. Isso é fundamental para fornecer um corpo robusto de conhecimento para ajudar a desenvolver uma boa compreensão das relações estrutura-atividade, pesquisa de doenças centrais e descobrir drogas seguras e eficazes.
É importante ressaltar que a tecnologia sem marcadores permite que os pesquisadores realizem análises que simplesmente não são possíveis usando métodos convencionais que fornecem apenas resultados finais. Estes incluem análise cinética e de afinidade e avaliação da especificidade de ligação, que são habilitadas pela análise de interação dinâmica e em tempo real proporcionada pelo monitoramento sem marcadores.
A análise de interação sem marcadores é adequada para minha aplicação?
Como aditivos comuns a soluções proteicas podem interferir na detecção de marcadores fluorescentes, os ensaios sem marcadores normalmente funcionam nos buffers biológicos mais comuns. Os métodos sem marcadores também são desejáveis porque geralmente são compatíveis com a detecção em tempo real. As tecnologias sem marcadores são atraentes para pesquisadores em uma ampla gama de aplicações, como: pesquisa biológica, descoberta e desenvolvimento de drogas bioterapêuticas e de pequenas moléculas, estudos de imunogenicidade e desenvolvimento de vacinas.
Várias abordagens livres de marcadores para a detecção de interações biomoleculares estão atualmente disponíveis. Elas incluem o uso de biossensores ópticos, como GCI, difração, microbalança de cristal de quartzo e microcalorimetria.
Quais soluções de interação sem marcadores são oferecidas pela Malvern Panalytical?
A Malvern Panalytical oferece os biossensores WAVEsystem e os microcalorímetros MicroCal PEAQ-ITC e MicroCal PEAQ-DSC - instrumentos de análise em solução potentes e bem estabelecidos e sem marcadores.
WAVEsystem
Instrumentos bioanalíticos de última geração para descoberta de medicamento...
Os biossensores usam a tecnologia GCI para estabelecer parâmetros críticos de reação, como a constante da taxa de associação (ka), a constante da taxa de dissociação (kd) e a constante de dissociação de equilíbrio (KD) das interações biomoléculas em tempo real. Os dados ricos em informações resultantes fornecem visões sobre os processos biológicos e os mecanismos que conduzem interações intra e intermoleculares. Essa tecnologia sem marcadores permite que o ligante nativo seja imobilizado em uma superfície de biossensor.
Intervalo do MicroCal PEAQ-ITC
O MicroCal PEAQ-ITC oferece dados de alta qualidade e sensibilidade excepci...
Os microcalorímetros MicroCal PEAQ-ITC podem detectar a associação e a dissociação de complexos moleculares, medindo as alterações no calor liberado ou absorvido quando as moléculas interagem.
Os dados ricos em informações resultantes fornecem visões sobre os processos biológicos e os mecanismos que conduzem interações intra e intermoleculares.
Linha MicroCal DSC
Análise padrão-ouro da estabilidade de proteínas para ambientes regulamenta...
O Microcal PEAQ-DSC pode detectar as mudanças de calor que ocorrem quando uma macromolécula, como uma proteína ou ácido nucleico, é desdobrada ou uma micela lipossomal se dissocia.
Isso é frequentemente usado para encontrar condições estabilizadoras para produtos biológicos, para desenvolvimento de ensaios para triagem de drogas e caracterização de proteínas e para desenvolvimento de vacinas.
